液相色譜儀如何測定色氨酸含量

1、實驗儀器與試劑

   色氨酸樣品，甲醇， 液相色譜儀梯度系統，紫外檢測器，手動進樣閥，色譜工作站，0.03%KH2PO4溶液

2、HPLC色譜分析條件

   流動相為0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），線性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱溫 35℃，檢測波長276nm。
流動相 時間（t/min）
 5 10 15 20
A（%） 80 90 80 70
B（%） 20 10 20 30

3、標準溶液的配制

   精密稱取色氨酸標準標準品50mg，置100ml容量瓶中，振搖，用流動相溶解到刻度，作為供試品溶液，另取色氨酸樣品適量，同法操作。

4、標準直線的制作

   精密稱取色氨酸標準樣品適量 ,分別稀釋制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色譜儀，以色氨酸峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標，制作回歸標準直線。

5、發酵液中樣品中色氨酸含量的測定
取發酵液，稀釋配制成約 500μg/ ml 的溶液，搖勻，過濾，取25μl進樣，在液相色譜儀下測量，記錄峰值面積，作圖。



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