如何正確配制和準備流動相？

1、溶劑的純化

   在液相色譜儀分析中，正相色譜以已烷作為流動相的主體，二氯甲烷、氯仿、乙醚作為改性劑;反相色譜以水作為主體，以甲醇、乙睛、四氫吠喃作為改性劑。HPLC分析均應使用HPLC級純度的溶劑，AR級的溶劑可能會由于雜質的存在而出現鬼峰。正相色譜分析中使用的己烷、二氯甲烷、氯仿、乙醚中經常含有微量的水分，這會改變液固色譜柱的分離性能，使用前應用球形分子篩柱脫去水分。反相色譜分析中使用的甲醇、乙睛、四氫吠喃，不必脫除微量水，但甲醇、乙睛等使用前經硅膠柱凈化，去除具有紫外吸收的雜質。要保證配制流動相用水的純度足夠高。由于去離子水通常含有一些有機物，所以不適合用于HPLc分析用，使用超純水（電阻率18Mfl.cm）。如果條件有限，可將去離子水再次蒸餾，現用現蒸，保持新鮮，還能脫去CO2，使用效果也不錯。

2、緩沖溶液

   有些分析需要用到緩沖鹽的流動相，配制時鹽試劑要用AR級以上、沒有污染、過期;現用現配，不要儲存時間過長，避免pH值發生變化和成分分解，影響色譜分離的效果。緩沖鹽的流動相能在實驗室自己配制，商品化的流動相可能會添加有硫代硫酸鈉穩定劑，會影響緩沖液的光學和色譜性能。

3、過濾

   無論是有機水溶液還是緩沖鹽溶液的流動相，配好后都要通過0.45卜m濾膜過濾后再上機使用，這樣能夠有效防止由于微粒的存在使流路管道堵塞。過濾后應把溶劑放在密閉容器中，以防止被重新污染。過濾后的溶液既可用于色譜分析，也可用于清洗諸如泵頭、柱塞桿、單向閥和密封圈等儀器部件，保持輸液泵的性能良好。

4、脫氣

   所有的流動相在進人HPLC系統之前都應該首先脫氣（即使儀器上有在線脫氣），因為沒有脫氣的流動相進人到高壓系統后存在的氣泡會導致系統的流速和壓力不穩定，出現鬼峰等間題。從溶液中排除氣泡的方法主要有:真空脫氣、氦氣脫氣和超聲波脫氣實際工作中真空抽濾的方法很有效，它既能脫氣又能過濾，但必須在上機前完成。在線連續脫氣可以防止氣體隨溫度的變化重新溶解在溶劑中。

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